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測(cè)定蘋果中維生素 C 的含量，常用的方法有碘量法、高效液相色譜法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法等。 1.碘量法：利用維生素 C 的還原性，將碘還原為碘離子，通過碘的消耗量來(lái)計(jì)算維生素 C 的含量。 2.高效液相色譜法：先將樣品處理后注入色譜儀，根據(jù)維生素 C 出峰的時(shí)間和峰面積來(lái)定量。 3.熒光法：維生素 C 被氧化后失去熒光，通過測(cè)定熒光強(qiáng)度的變化來(lái)確定其含量。 4.2,6-二氯靛酚滴定法：用染料 2,6-二氯靛酚滴定樣品中的維生素 C，根據(jù)染料的用量計(jì)算含量。 5.分光光度法：基于維生素 C 對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收特性，通過測(cè)量吸光度來(lái)計(jì)算含量。 不同的測(cè)定方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中需根據(jù)具體情況選擇合適的方法，以獲得準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。

目前,測(cè)定果蔬中的維生素C含量的方法一般采用電位滴定法[2],碘量法[1]等,但所有這些方法都有標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定繁瑣,操作程序復(fù)雜,費(fèi)時(shí)等缺點(diǎn).根據(jù)Fe3+使維生素C氧化成脫氫抗壞血酸,脫氫抗壞血酸再與2,4-二硝基苯肼作用生成脎,脎的量與抗壞血酸含量成正比這一原理,采用分光光度法直接測(cè)定大棗中的維生素C含量.本方法與傳統(tǒng)碘量法測(cè)定大棗中的維生素C的含量,結(jié)果基本一致,因而本方法結(jié)果可靠.另外本方法操作簡(jiǎn)便,重現(xiàn)性好,克服了碘量法的缺點(diǎn).

你好，維生素c的含量是用原子吸收法和分光光度法來(lái)測(cè)定的。

在測(cè)定維生素C的國(guó)標(biāo)方法中,熒光法為測(cè)定食物中維生素C含量的第一標(biāo)準(zhǔn)方法,2,4－二硝基苯肼法作為第二法.一,熒光法1.原理樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后,與鄰苯二胺（OPDA）反應(yīng)生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline）,其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比,以此測(cè)定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量.脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物而不與OPDA反應(yīng),以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾.本方法的最小檢出限為0.022g/ml.2.適用范圍GB12392-90本方法適用于蔬菜,水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定3.儀器3.1.實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備.3.2.熒光分光光度計(jì)或具有350nm及430nm波長(zhǎng)的熒光計(jì).3.3.打碎機(jī).4.試劑本實(shí)驗(yàn)用水均為蒸餾水,試劑不加說明均為分析純?cè)噭?（1）偏磷酸－乙酸液：稱取15g偏磷酸,加入40ml冰乙酸及250ml水,攪拌,放置過夜使之逐漸溶解,加水至500ml.4℃冰箱可保存7～10天.（2）0.15mol/L硫酸：取10ml硫酸,小心加入水中,再加水稀釋至1200ml.（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液為稀釋液,其余同4.1.配制.（4）50％乙酸鈉溶液：稱取500g乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）,加水至1000ml.（5）硼酸-乙酸鈉溶液：稱取3g硼酸,溶于100ml乙酸鈉溶液（4.4）中.臨用前配制.（6）鄰苯二胺溶液：稱取20mg鄰苯二胺,于臨用前用水稀釋至100ml.（7）0.04%百里酚藍(lán)指示劑溶液：稱取0.1g百里酚藍(lán),加0.02mol/L氫氧化鈉溶液,在玻璃研缽中研磨至溶解,氫氧化鈉的用量約為10.75ml,磨溶后用水稀釋至250ml.變色范圍：pH=1.2紅色pH=2.8黃色pH＞4.0蘭色（8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L1+9鹽酸中,加熱回流1~2h,過濾,用水洗至濾液中無(wú)鐵離子為止,置于110~120℃烘箱中干燥,備用.（9）標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/ml）：準(zhǔn)確稱取50mg抗壞血酸,用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中,并稀釋至刻度.抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（100μg/ml）：取10ml抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)液,用偏磷酸-乙酸溶液稀釋至100ml.定容前試pH值,如其pH＞2.2時(shí),則應(yīng)用溶液（4.3）稀釋.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取下述"標(biāo)準(zhǔn)"溶液（抗壞血酸含量10μg/ml）0.5,1.0,1.5和2.0ml標(biāo)準(zhǔn)系列,取雙份分別置于10ml帶蓋試管中,再用水補(bǔ)充至2.0ml.5.操作步驟5.1樣品制備全部實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)避光.稱取100g鮮樣,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入打碎機(jī)內(nèi)打成勻漿,用百里酚藍(lán)指示劑調(diào)試勻漿酸堿度.如呈紅色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀釋,若呈黃色或蘭色,則用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀釋,使其pH為1.2.勻漿的取量需根據(jù)樣品中抗壞血酸的含量而定.當(dāng)樣品液含量在40~100μg/ml之間,一般取20g勻漿,用偏磷酸-乙酸溶液稀釋至100ml,過濾,濾液備用.5.2氧化處理：分別取樣品濾液及標(biāo)準(zhǔn)使用液各100ml于帶蓋三角瓶中,加2g活性炭,用力振搖1min,過濾,棄去最初數(shù)毫升濾液,分別收集其余全部濾液,即樣品氧化液和標(biāo)準(zhǔn)氧化液,待測(cè)定.5.3各取5ml標(biāo)準(zhǔn)氧化液于2個(gè)50ml容量瓶中,分別標(biāo)明"標(biāo)準(zhǔn)"及"標(biāo)準(zhǔn)空白".5.4各取5ml樣品氧化液于2個(gè)50ml容量瓶中,分別標(biāo)明"樣品"及"樣品空白".5.5于"標(biāo)準(zhǔn)空白"及"樣品空白"溶液中各加5ml硼酸-乙酸鈉溶液,混合搖動(dòng)15min,用水稀釋至50ml,在4℃冰箱中放置2h,取出備用.5.6于"樣品"及"標(biāo)準(zhǔn)"溶液中各加入5ml50%乙酸鈉溶液,用水稀釋至50ml,備用.5.7熒光反應(yīng)取"標(biāo)準(zhǔn)空白"溶液,"樣品空白"溶液及（5.6）中"樣品"溶液各2ml,分別置于10ml帶蓋試管中.在暗室中迅速向各管中加入5ml鄰苯二胺,振搖混合,在室溫下反應(yīng)35min,用激發(fā)光波長(zhǎng)338nm,發(fā)射光波長(zhǎng)420nm測(cè)定熒光強(qiáng)度.標(biāo)準(zhǔn)系列熒光強(qiáng)度分別減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的抗壞血酸含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行相關(guān)計(jì)算,其直線回歸方程供計(jì)算時(shí)使用.6.計(jì)算X=（c×V/m）×F×(100/1000)式中：X-----樣品中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量,mg/100g；c------由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得樣品溶液濃度,μg/ml；m-----試樣質(zhì)量,g；F------樣品溶液的稀釋倍數(shù)；V------熒光反應(yīng)所用試樣體積,ml.例：測(cè)定每一制備溶液的熒光強(qiáng)度.用標(biāo)準(zhǔn)溶液每ml含2.5μg,5.0μg,7.5μg及10.0μg,各標(biāo)準(zhǔn)濃度管讀數(shù)減去相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)空白讀數(shù)的各平均值做標(biāo)準(zhǔn)曲線.由樣品液讀數(shù)減去樣品液空白讀數(shù)之值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的抗壞血酸（μg/ml）,按取樣量及稀釋率計(jì)算樣品中抗壞血酸的含量.如：取制備好的辣椒樣品2.138g,稀釋到100ml,氧化后分別取10ml濾液稀釋到50ml樣品讀數(shù)為23.34,樣品空白讀數(shù)為3.188,樣品讀數(shù)減去樣品空白讀數(shù)為20.152,查熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸的2.23μg.2.23×10050100-----×-×--=52（mg/100g）2.1381010007.注意事項(xiàng)7.1大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶,因此,抗壞血酸的測(cè)定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品制成勻漿以保存維生素C.7.2某些果膠含量高的樣品不易過濾,可采用抽濾的方法,也可先離心,再取上清液過濾.7.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸,但它也有吸附抗壞血酸的作用,故活性炭用量應(yīng)適當(dāng)與準(zhǔn)確,所以,應(yīng)用天平稱量.我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,用2g活性炭能使測(cè)定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型,其吸附影響不明顯.二,2,4-二硝基苯肼法1.原理總抗壞血酸包括還原型,脫氫型和二酮古樂糖酸.樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸,再與2,4-二硝基苯肼作用生成紅色脎,脎的含量與總抗壞血酸含量成正比,進(jìn)行比色測(cè)定.2.適用范圍GB12392-90本方法適用于蔬菜,水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定.3.儀器3.1恒溫箱：37±0.5℃3.2可見-紫外分光光度計(jì)3.3打碎機(jī)4.試劑本實(shí)驗(yàn)用水均為蒸餾水,試劑純度均為分析純.4.14.5mol/L硫酸：謹(jǐn)慎地加250ml硫酸（比重1.84）于700ml水中,冷卻后用水稀釋至1000ml.4.285%硫酸：謹(jǐn)慎地加900ml硫酸（比重1.84）于100ml水中.4.32%2,4-二硝基苯肼溶液：溶解2g2,4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸內(nèi),過濾.不用時(shí)存于冰箱內(nèi),每次用前必須過濾.4.42%草酸溶液：溶解20g草酸于700ml水中,稀釋至1000ml.4.51%草酸溶液：稀釋500ml2%草酸溶液到1000ml.4.61%硫脲溶液：溶解5g硫脲于500ml1%草酸溶液中.4.72%硫脲溶液：溶解10g硫脲于500ml1%草酸溶液中.4.81mol/L鹽酸：取100ml鹽酸,加入水中,并稀釋至1200ml.4.9活性炭：將100g活性炭加到750ml1mol/L鹽酸中,回流1~2h,過濾,用水洗數(shù)次,至濾液中無(wú)鐵離子（Fe3+）為止,然后置于110℃烘箱中烘干.4.10標(biāo)準(zhǔn)（1）抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/ml）：溶解100mg純抗壞血酸于100ml1%草酸溶液中.（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制加1g活性炭于50ml標(biāo)準(zhǔn)溶液中,搖動(dòng)1min,過濾.取10ml濾液放入500ml容量瓶中,加5.0g硫脲,用1%草酸溶液稀釋至刻度.抗壞血酸濃度為20μg/ml.取5,10,20,25,40,50,60ml稀釋液,分別放入7個(gè)100ml容量瓶中,用1%硫脲溶液稀釋至刻度,使最后稀釋液中抗壞血酸的濃度分別為1,2,4,5,8,10及12μg/ml.按樣品測(cè)定步驟形成脎并比色.以吸光值為縱坐標(biāo),以抗壞血酸濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.5.操作步驟5.1樣品制備全部實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)避光.5.1.1鮮樣制備：稱100g鮮樣和100g2%草酸溶液,倒入打碎機(jī)中打成勻漿,取10-40g勻漿（含1-2mg抗壞血酸）倒入100ml容量瓶中,用1%草酸溶液稀釋至刻度,混勻.5.1.2干樣制備：稱1-4g干樣（含1-2mg抗壞血酸）放入乳缽內(nèi),加入1%草酸溶液磨成勻漿,倒入100ml容量瓶中,用1%草酸溶液稀釋至刻度,混勻.5.1.3將上述兩液過濾,濾液備用.不易過濾的樣品可用離心機(jī)沉淀后,傾出上清液,過濾,備用.5.2氧化處理：取25ml上述濾液,加入0.5g活性炭,振搖1min,過濾,棄去最初數(shù)毫升濾液.取10ml此氧化提取液,加入10ml2%硫脲溶液,混勻.5.3呈色反應(yīng)5.3.1于三個(gè)試管中各加入4ml稀釋液.一個(gè)試管作為空白,在其余試管中加入1.0ml2%2,4-二硝基苯肼溶液,將所有試管放入37±0.5℃恒溫箱或水浴中,保溫3h.5.3.23h后取出,除空白管外,將所有試管放入冰水中.空白管取出后使其冷到室溫,然后加入1.0ml2%2,4-二硝基苯肼溶液,在室溫中放置10~15min后放入冰水內(nèi).其余步驟同樣品.5.3.385%硫酸處理：當(dāng)試管放入冰水后,向每一試管中加入5ml85%硫酸,滴加時(shí)間至少需要1min,需邊加邊搖動(dòng)試管.將試管自冰水中取出,在室溫放置30min后比色.5.3.4比色：用1cm比色杯,以空白液調(diào)零點(diǎn),于500nm波長(zhǎng)測(cè)吸光值.6.計(jì)算同熒光法.7.注意事項(xiàng)7.1大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶,因此,抗壞血酸的測(cè)定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用2%草酸溶液制成勻漿以保存維生素C.7.2若溶液中含有糖,硫酸加得太快,溶解熱會(huì)使溶液變黑.7.3試管自冰水中取出后,顏色會(huì)繼續(xù)變深,所以,加入硫酸后30分鐘應(yīng)準(zhǔn)時(shí)比色.