生物素與親和素
生物素與親和素,我的一個環(huán)狀小肽,想對其進行生物素標記,但只有一個精氨酸有游離氨基,因為形成了環(huán)狀,N端沒有游離氨基了,這樣可以標記上嗎?
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生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合,形成的生物素衍生物,不僅保持了大分子物質的原有生物活性,而且比恬度高,具多價性。此外,每個親和素分子有四個生物素結合部位,可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此,生物素-親合素系統(tǒng)具有多級放大作用,使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。
2016-03-11 07:01
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回答4
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生物素-親合素系統(tǒng)原理:生物素-親合素系統(tǒng)是在常規(guī)ELISA原理的基礎上,結合生物素與親和素間的高度放大作用,而建立的一種檢測系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白,分子量為68kDa,由4個亞單位組成,對生物有非常高的親和力(結合常數(shù)高達1015M-1)。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣,結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應,既起到了多級放大作用,又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色,達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。
2016-03-11 00:27
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回答3
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親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,由于每個分子由4個亞基組成,因此可以和4個生物素分子親密結合。生物素在人體內是不能單獨起作用的,它需要與其他酶、氨基酸脂肪衍生物等結合來綜合調控。生物素結合常數(shù)即表示了它與其他有機分子結合能力的大小。
2016-03-10 22:21
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生物素化的抗體,是在抗體上連接生物素,生物素能和親和素特異性高親和性結合,親和力是抗原抗體結合的一萬倍,這樣又起到級聯(lián)放大的作用。所以能更加靈敏的顯示微量抗原。這種方法也叫親和免疫組化。
2016-03-10 16:05
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回答1
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生物素親和素系統(tǒng)的特點主要表現(xiàn)在以下幾個方面。1.靈敏度:生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合,形成的生物素衍生物,不僅保持了大分子物質的原有生物活性,而且比恬度高,具多價性。此外,每個親和素分子有四個生物素結合部位,可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此,生物素-親合素系統(tǒng)具有多級放大作用,使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。2.特異性:親和素與生物素間的結合具有極高的親和力,其反應呈高度專一性。因此,BAS的多層次放大作用在提高靈敏度的同時,并不增加非特異性干擾。而且,BAS結合特性不會因反應試劑的高度稀釋而受影響,使其在實際應用中可最大限度地降低反應試劑的非特異作用。3.穩(wěn)定性:親和素結合生物素的親和常數(shù)可為抗原-抗體反應的百萬倍,二者結合形成復合物的解離常數(shù)很小,呈不可逆反應性;而且酸、堿、變性劑、蛋白溶解酶以及有機溶劑均不影響其結合。因此,BAS在實際應用中,產(chǎn)物的穩(wěn)定性高,從而可降低操作誤差,提高測定的精確度。4.適用性:生物素和親和素均可制成多種衍生物,不僅可與酶、熒光素和放射性核素等各類標記技術結合,用于檢測體液、組織或細胞中的抗原-抗體、激素—受體和核酸系統(tǒng)以及其他多種生物學反應體系,而且也可制成親和介質,用于分離提純上述各反應體系中的反應物。此外,多種BAS的商品化試劑,為臨床檢測和科研工作提供了有利條件。5.其他:生物素-親合素系統(tǒng)可依據(jù)具體實驗方法要求制成多種通用性試劑(如生物素化第二抗體等)適用于不同的反應體系,而且都可高度稀釋,用量很少,實驗成本低;尤其是生物素-親合素系統(tǒng)與成本高昂的抗原特異性第一抗體偶聯(lián)使用,可使后者的用量大幅度減少,節(jié)約實驗費用.此外,由于生物素與親和素的結合具高速、高效的特性,盡管生物素-親合素系統(tǒng)的反應層次較多,但所需的溫育時間不長,實驗往往只需數(shù)小時即可完成
2016-03-10 14:23
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