（1）鏡檢：先用小刀刮棄病甲和大而疏松的甲屑，再刮取于載玻片上，百分之十氫氧化鉀后加蓋玻片，在酒精燈上加熱以溶解角質(zhì)。顯微鏡下可見孢子和菌絲。

（2）培養(yǎng)：由于致病菌多樣，所用培養(yǎng)基應(yīng)注意多樣化，應(yīng)分別使用含和不含放線菌酮的沙堡弱培養(yǎng)基，以避免某些對(duì)放線菌敏感的菌被抑制而出現(xiàn)假陰性。若要分離馬拉色菌則要用含菜子油或橄欖油的培養(yǎng)基，35-37℃條件下培養(yǎng)。分離出不常見菌不能立即斷定為致病菌，但也不能輕易判斷為污染菌，應(yīng)重復(fù)取材多次培養(yǎng)，才能確定其在致病中的地位。

（3）組織病理學(xué)：是確定灰指甲診斷的另一種技術(shù)，盡管向近端多剪甲及甲下角化物，經(jīng)脫鈣、軟化后切片，PAS或銀染色。可見甲組織中發(fā)現(xiàn)大量孢子和菌絲斷面，比培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)真菌的陽性率高并有助于區(qū)別真菌是侵入甲還是定植在甲下脆屑。但因病甲組織堅(jiān)硬，處理操作過程較復(fù)雜，且右時(shí)在切片上難以確定是菌體或其他成分，需要一定經(jīng)驗(yàn)。

（4）溶甲涂片：新近我們采用20c70 KOH或NaOH住56℃加熱30分鐘，將甲的角蛋白溶解，經(jīng)離心洗滌后取被溶解的菌體成分涂片用Parker墨水染色，在鏡下可見，不僅可大大提高查菌陽性率，而且能完整地觀察到菌體在甲內(nèi)的形態(tài)特征，發(fā)現(xiàn)了白念珠菌的頂端厚壁孢子、絲狀菌的孢子頭、青霉菌的終狀枝等結(jié)構(gòu)，與純培養(yǎng)標(biāo)本涂片所見一致。

（5）電鏡觀察：包括掃描電鏡和透射電鏡，分別觀察表面和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，主要用于研究。