“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個實驗室完全密封，室內(nèi)處于負壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動，確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染。” 廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室主任林劍國說，而“這里”指的就是P3實驗室。省二醫(yī)每天400多份新冠肺炎核酸檢測就是在這里開展的。

現(xiàn)在，讓我們一起來揭開省二醫(yī)P3實驗室的神秘面紗，看看病毒究竟在P3實驗室是怎樣被“揪出來”的？

P3實驗室主任林劍國博士

譽為“偵察兵”的檢測團隊

揭秘一：前世今生

P3實驗室是生物安全防護三級實驗室，P是Protection的縮寫。整個實驗室完全密封，室內(nèi)處于負壓狀態(tài)，實驗室內(nèi)部的氣體不會泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單項流動。

根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護實驗室分為四級，一級最低，四級最高。一級實驗室一般適用于對健康成年人無致病作用的微生物；二級適用于對人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；三級適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四級適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。省二醫(yī)新冠病毒核酸檢測就是在P3實驗室進行的。

揭秘二：抽絲剝繭

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細活，容不得半點馬虎。在操作中，實驗員面對眼前的樣本，需要“一個一個地揭開蓋子，開蓋加樣和核酸提取”，這無疑是與“病毒”正面交鋒。

實驗室內(nèi)的檢測流程可分為5個步驟：樣本進入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴增反應判斷結(jié)果——高壓滅菌。

1、樣本進入實驗室——“傳遞窗”隔離空氣

圖一 “傳遞窗”也叫做Air Lork（空氣鎖）

采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進入P3實驗室前得先進入一個特殊的窗口——“傳遞窗”，這個窗口也叫做Air Lork，空氣鎖。顧名思義，與空氣有關(guān)，這個傳遞窗有不能同時打開的雙重門，保證傳遞樣本時帶進去的空氣被隔離在雙重門中，保證實驗室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本的命運起點，在這里開啟它在實驗室中短暫的一生。

2、檢測前的滅活處理——相對安全

樣本在水浴箱經(jīng)半個小時56℃高溫滅活，這樣會使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在對樣本進行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。

3、檢測的核心環(huán)節(jié)——進行開蓋加樣和核酸提取

標本處理間，在這里進行開蓋加樣和核酸提取

省二醫(yī)檢驗醫(yī)學部副主任技師胡亮杉是進入P3負壓實驗室完成設(shè)備調(diào)試、程序設(shè)定、試劑試用等前期準備工作的第一人。據(jù)她介紹，在標本處理間，實驗員拿到滅活后的樣本時，第一個動作就是振蕩，盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養(yǎng)基溶液中，再靜置五分鐘進行沉淀。

接下來就是開蓋加樣，必須人手操作，而且需要兩個人高度配合才能完成，一人擰開樣本罐蓋子，另一人拿著微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液，放到另一個提取管里，一個樣本對應一個提取管，再擰上管蓋。就這樣，400多份樣本要打開瓶蓋吸取轉(zhuǎn)移400多次，每一次都是實驗員與病毒面對面的“開撕”。

“樣本在開蓋轉(zhuǎn)移的過程中，病毒非常容易暴露在實驗室的空氣中，近在咫尺，與我們幾乎就是零距離的接觸了。”胡亮杉說，“開蓋加樣的時候，拿著微量移液器的手往往因為戴著雙重手套，而顯得有些笨拙，可又不得不小心翼翼，再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔，所有動作都顯得緩慢，手也因為動作的緩慢勞累而不時顫抖，經(jīng)常是左手扶著右手完成加樣的?！?/p>

人工核酸提取的步驟更是復雜，考驗的是需要實驗員的耐心與謹慎?！昂怂崽崛】梢允褂脙x器輔助，但由于比對的需要，往往要加以人工操作，需要反復進行離心、加試劑、洗滌等10多個步驟，其中需要打開管蓋的操作就達7次以上，完成一例人工核酸提取要50分鐘左右?！焙辽颊f。

4、 擴增反應——45個循環(huán)繪制熒光曲線判斷結(jié)果

通過核酸擴增儀進行擴增反應

根據(jù)曲線和參數(shù)分析判斷結(jié)果

提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi)，就要上儀器了。提取的核酸加入到擴增試劑中，通過熒光PCR儀進行RT-PCR反應，先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點進行擴增，利用不同的溫度進行變性、退火和延伸，每個循環(huán)采集熒光值，45個循環(huán)后繪制熒光曲線，用時約110分鐘，實驗員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽性。

5、污染物的高壓滅菌處理

實驗過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理?！拔锪鳌钡慕K點在這里就結(jié)束了。

產(chǎn)生的污物高壓滅菌后處理

揭秘三：傾柯衛(wèi)足

“三流”中的“人流”又是什么？來看看工作人員是如何工作的。

首先在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級防護服——通過緩沖間進入到實驗室內(nèi)負壓工作間，在這里進行標本處理，核酸提取及檢測——完畢后進行空間、表面消毒，按順序脫下防護服——通過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟一個都不能少！

通過緩沖間進入到實驗室內(nèi)

核酸檢測的主要宗旨是高效、有序和安全。為了確保安全，省二醫(yī)采取了多種措施，第一，人員的篩選；第二，崗前進行安全培訓；第三，進行嚴格的消毒滅菌制度；第四，感控督導員制度。到目前為止，P3實驗室未出現(xiàn)過生物安全問題，當然也與平時訓練有關(guān)。

穿著三級防護裝備

揭秘四：棄偽存真

任何一個環(huán)節(jié)都不能忽視，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導致“假陰性”或“假陽性”。因此，為保障檢測的質(zhì)量，檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對與復核。

據(jù)介紹，檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開始了，樣本采集的醫(yī)務人員必須經(jīng)過嚴格的培訓和考核才能上崗，樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動作流程都必須按規(guī)定進行，樣本采集完后的護送工作都需按照嚴密的程序，由專人專道配送到實驗室。

在檢測過程中，實驗員謹慎進行每一次測試，針對可疑樣本，選用不同的試劑進行復核確定，以防止“假陰性”的出現(xiàn)；其次，每進行一批實驗，均會隨機插入三個以上空白對照，針對陽性樣本會進行病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”的出現(xiàn)。

檢測后，定期隨機抽取檢測后的樣本送第三方實驗室進行檢測，對數(shù)據(jù)進行對比分析，同時也參加衛(wèi)生部和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評，保障檢測的準確性。

揭秘五：所向披靡

P3檢測團隊目前有21人，實行一天三班制。實驗室嚴格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實驗室負壓密閉的空間里穿著三級防護裝備，5個小時不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的需要。不僅如此，檢測人員還要克服心理上的恐懼。咽拭子樣本是從疑似患者鼻咽部采集，可能含有較多新冠病毒，檢測人員從采樣罐里拿出樣本時，在這樣密閉的環(huán)境中很容易借助空氣傳播，但他們依然無怨無悔地戰(zhàn)斗在前線，把好第一道關(guān)。

“他們與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護人員不同，他們藏在實驗室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見的‘最前線’?！笔《t(yī)P3主任林劍國說。

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