1）作為體內生化反應中一碳單位轉移酶系的輔酶，起著一碳單位傳遞體的作用。

2）參與嘌呤和胸腺嘧啶的合成，進一步合成DNA和RNA。

3）參與氨基酸代謝，在甘氨酸與絲氨酸、組氨酸和谷氨酸、同型半胱氨酸與蛋氨酸之間的相互轉化過程中充當一碳單位的載體。

4）參與血紅蛋白及甲基化合物如腎上腺素、膽堿、肌酸等的合成。

葉酸對蛋白質、核酸的合成及各種氨基酸的代謝有重要作用。

參與嘌呤和嘧啶合成：作為輔酶參與核酸合成中嘌呤和嘧啶的形成，在細胞DNA合成中發(fā)揮作用。

參與氨基酸相互轉化：參與二碳氨基酸和三碳氨基酸相互轉化。促進了苯丙氨酸與酪氨酸，組氨酸與谷氨酸，半胱氨酸與蛋氨酸的轉化。此外，葉酸還是含鐵血紅蛋白的組分。